FRET պեպտիդային տեխնոլոգիա

Ֆլյուորեսցենտային ռեզոնանսային էներգիայի փոխանցում (FRET)

Ֆլյուորեսցենտային ռեզոնանսային էներգիայի փոխանցումը (FRET) էներգիայի ոչ ճառագայթային փոխանցման գործընթաց է, որի ժամանակ դոնորի գրգռված վիճակի էներգիան փոխանցվում է ընդունող գրգռված վիճակին՝ միջմոլեկուլային էլեկտրական զույգերի փոխազդեցության միջոցով:Այս գործընթացը չի ներառում ֆոտոններ և, հետևաբար, ոչ ճառագայթային է:Այս վերլուծությունն ունի արագ, զգայուն և պարզ լինելու առավելությունները:

FRET վերլուծության մեջ օգտագործվող ներկը կարող է նույնական լինել:Բայց շատ ծրագրերում իրականում օգտագործվում են տարբեր ներկանյութեր:Մի խոսքով, լուսային ռեզոնանսային էներգիայի փոխանցումը զույգ դիպոլների փոխանցում է դոնորից (ներկ 1) դեպի ընդունող (ներկ 2), երբ դոնոր խումբը հուզված է:Ընդհանուր առմամբ, դոնոր ֆտորոֆոր խմբի արտանետումների սպեկտրը համընկնում է ընդունող խմբի կլանման սպեկտրի հետ:«Երբ երկու ֆտորոֆորների միջև հեռավորությունը համապատասխան է (10-100 Ա), կարելի է դիտարկել ֆտորոֆորի էներգիայի փոխանցումը դոնորից դեպի ընդունող»:Էներգիայի փոխանցման մեթոդը կախված է ընկալիչի քիմիական կառուցվածքից.

1. Փոխակերպվում է մոլեկուլային թրթիռի, այսինքն՝ անհետանում է էներգիայի փոխանցման լուսավոր լույսը։(Ռեցեպտորը լույսի մարման միջոց է)

2. Արտանետումն ավելի ինտենսիվ է, քան բուն ընկալիչը, ինչը հանգեցնում է երկրորդային ֆլուորեսցենտային սպեկտրի կարմիր տեղաշարժի»:(Ռեցեպտորները լուսավոր արտանետիչներ են):

Դոնորային խումբը (EDANS) և ընդունող գենը (DABCYL) միատեսակ կապված են ՄԻԱՎ-ի պրոթեզերոնի բնական սուբստրատի հետ, և երբ սուբստրատը անջատված չէ, DABCYL-ը կարող է մարել EDANS-ը և այնուհետև դառնալ ֆտորի համար աննկատելի:ՄԻԱՎ-1 պրոթեզերոնի անջատումից հետո EDANS-ն այլևս չի մարվում DABCYL-ով, և EDANS լյուցիֆերազները կարող են հետագայում հայտնաբերվել:Պրոթեզերոնի ինհիբիտորների առկայությունը կարող է վերահսկվել EDANS-ի ֆլուորեսցենտային ինտենսիվության փոփոխությամբ:

FRET պեպտիդները հարմար գործիքներ են պեպտիդազի ոչ սպեցիֆիկությունը ուսումնասիրելու համար:Քանի որ դրա ռեակցիայի գործընթացը կարող է շարունակաբար վերահսկվել, այն ապահովում է հարմար մեթոդ ֆերմենտի ակտիվությունը հայտնաբերելու համար:Դոնորի/ընդունողի կողմից պեպտիդային կապերի հիդրոլիզից հետո առաջացած փայլը ապահովում է ֆերմենտի ակտիվության չափումը նանոմոլային կոնցենտրացիաներում:Երբ FRET պեպտիդը անձեռնմխելի է, այն ցույց է տալիս ներքին բռնկման հանկարծակի անհետացումը, բայց երբ դոնորին/ընդունողին հակառակ որևէ պեպտիդային կապ կոտրվում է, այն արձակում է բռնկում, որը կարելի է անընդհատ հայտնաբերել, և ֆերմենտի ակտիվությունը կարող է քանակականացվել: